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DNA CpG甲基化檢測—BSP法
作者:admin    發(fā)表時間:2015-01-23

DNA CpG甲基化檢測—BSP法

  DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應(yīng),在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位點,它在基因組中呈不均勻分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域,在哺乳動物中mC約占C總量的2-7%。一般說來,DNA的甲基化會抑制基因的表達。DNA的甲基化對維持染色體的結(jié)構(gòu)、X染色體的失活、基因印記和腫瘤的發(fā)生發(fā)展都起重要的作用。
  BSP法原理:用亞硫酸氫鈉修飾處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變?;蚪MDNA經(jīng)亞硫酸鹽處理后,設(shè)計BSP引物擴增目的片段,此時尿嘧啶(U)全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶(T),最后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化。

服務(wù)價格

服務(wù)編號

服務(wù)內(nèi)容

價格

周期

CWS024

PCR產(chǎn)物直接測序

¥1198/樣品

1周

 

服務(wù)內(nèi)容
  1. 基因組DNA的Bisulfite轉(zhuǎn)化。
  2. BSP(Bisulfite Sequencing PCR)法,PCR產(chǎn)物直接測序,包括引物設(shè)計,不包括合成。

樣品要求
  ·若提供基因組DNA,需≥2ug。
  ·若提供的材料為新鮮組織、血液、細(xì)胞等生物材料,請?zhí)峁┳銐蛱崛?ug以上基因DNA的材料量。
  ·基于所選擇的DNA甲基化檢測方法,請?zhí)峁┫鄳?yīng)的引物或引物序列。


終產(chǎn)品
  ·Bisulfite處理的基因組DNA;
  ·實驗報告(包括BSP產(chǎn)物的直接測序報告)。

服務(wù)說明
  ·在基于Bisulfite 轉(zhuǎn)化的DNA甲基化檢測的方法中,引物是決定實驗成敗的關(guān)鍵因素,且視期望檢測的目的基因片段的不同,適宜引物的存在與否有較大的不確定性,請盡量采用其可行性經(jīng)過驗證的引物,如因引物等非本公司原因?qū)е履硨嶒灢襟E失敗,使服務(wù)提前終止,已啟動的實驗項目正常收費。若需DNA甲基化檢測用引物設(shè)計服務(wù),價格另議。
  ·視BSP產(chǎn)物序列的不同,采用直接檢測有可能導(dǎo)致實驗結(jié)果的可靠性降低;視BSP引物特異性的不同,BSP產(chǎn)物的克隆測序存在插入片段與目的片段不符合的可能性,建議選擇同時對多個克?。?gt;15個)進行測序,以獲得足夠的數(shù)據(jù)用于后期分析,最后提供客戶5個有效克隆測序結(jié)果。

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