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相對定量 (mRNA表達量分析)：基因表達的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和內(nèi)參基因同時分別進行定量，然后求出對于內(nèi)參基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的mRNA進行表達量分析。內(nèi)參基因通常選用表達量相對恒定的Housekeeping Gene，如：GAPDH、β-actin等。通過同時對內(nèi)參基因的實時檢測，可以對樣品之間由于起始細胞數(shù)不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進行校正，達到在嚴(yán)格意義上對樣品之間的mRNA表達量進行分析之目的。
PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累，因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
服務(wù)價格
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服務(wù)編號 |
服務(wù)內(nèi)容 |
價格 |
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CWS022 |
合成探針 |
￥2000/條 |
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CWS027 |
樣品檢測 |
￥298/樣品?基因 |
服務(wù)內(nèi)容
以熒光定量PCR方法對樣本基因表達進行相對定量。
服務(wù)優(yōu)勢
·先進的儀器，優(yōu)質(zhì)的試劑，專業(yè)的團隊，實驗結(jié)果更可靠。
·免費設(shè)計優(yōu)化引物，使定量PCR反應(yīng)擴增效率達到90%以上，使相對定量結(jié)果更可靠。
樣品要求
客戶需提供組織、細胞、血液等樣品材料，或純化好的總RNA或總DNA，反轉(zhuǎn)錄好的cDNA樣品，具體要求如下：
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材料種類 |
樣品要求 |
起始量 |
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血液 |
新鮮血液及抗凝劑處理的全血 |
1ml |
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培養(yǎng)細胞 |
離心收集的細胞 |
1x107 |
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動物組織 |
一般材料 |
100mg |
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植物 |
一般材料 |
100mg |
| RNA | OD260/OD280在1.9-2.1之間，完整性好 | >1ug |
| DNA | OD260/OD280在1.7-1.9之間，完整性好 | >1ug |
| cDNA | 內(nèi)參基因檢測成功 | >20ul |
終產(chǎn)品
·目的基因剩余引物 (上游引物和下游引物，合成量≥2OD)；
·目的基因引物序列；
·相對定量實驗報告；
·剩余探針。
服務(wù)說明
·客戶提供基因序列。
·以上報價是以提取的核酸（DNA或cDNA）為起始材料設(shè)定的，如果需要進行核酸純化，費用另計。
·如因?qū)嶒灢牧系确潜竟驹蛟斐赡硨嶒灢襟E失敗，使實驗提前終止，已啟動的實驗項目仍正常收費。
·公司還提供絕對定量服務(wù)，客戶需提供標(biāo)準(zhǔn)品，若需制備標(biāo)準(zhǔn)品，費用另計。